### 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（以SD大鼠为例）

#### 一、实验材料准备

选择体重约200克、年龄为2周左右的SD大鼠作为实验对象。需准备的器材包括灭菌镊子、眼科剪刀（直剪和弯剪）、磁珠等，另外准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉以固定大鼠。此外，需用75%乙醇进行消毒，准备预冷的无菌PBS溶液、15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等。培养基则选择含有SD大鼠脂肪间充质干细胞的完全培养基。

#### 二、实验操作流程

首先，将所有所需实验器材放置于超净工作台，并进行紫外线消毒30分钟。配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并采用过滤法进行除菌处理。将SD大鼠通过脱颈方式处死后，立即将其浸泡在75%酒精中2-3分钟，然后放置于超净工作台，并固定在泡沫板上。在剪开大鼠腹股沟区皮肤以暴露腹腔和脂肪组织时，需小心操作以避免损伤。

接下来，仔细剪取脂肪组织并将其放入PBS中，避免剪到血管。用PBS对脂肪组织进行清洗，并剔除多余的血管和淋巴结。将脂肪组织剪成约2mm×2mm的小块，加入胶原酶后在37℃下进行消化，期间每隔5分钟震荡一次或持续搅拌。待消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中，进行离心操作，并去除上层脂肪泡沫和上清液，以培养基重悬细胞沉淀。

随后，将细胞悬液进行过滤，再次离心后弃去上清液，以培养基重悬，并接种到无菌培养瓶中。最后，将培养瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中进行细胞培养。

#### 三、注意事项

在整个实验过程中，需严格保持无菌操作，以避免细胞污染。在剪取和清洗脂肪组织时，应更加细致，以保障细胞不受损伤并避免杂质的带入。另外，消化过程中的时间和温度需控制适宜，以避免过度消化对细胞造成损伤。此外，在离心和过滤操作中也需轻柔对待，以最小化细胞的损失或破裂。

在科学研究和生物医疗领域，提取和培养脂肪间充质干细胞非常重要，这不仅推动了干细胞研究的发展，也是诸多应用的基础。为了确保结果的准确性和有效性，选择具有良好声誉的品牌，如尊龙凯时，在实验材料及设备上具有较高的保障。