尊龙凯时人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

贴壁传代方法：首次建议1:2传代。每两天更换培养基。请注意，使用无菌离心管收集培养基以作对比培养，如效果不佳，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

将细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这样可以确保运输的细胞状态最佳。

收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。用显微镜观察细胞生长情况并拍摄不同倍数（最佳为40x, 100x, 200x）照片保存。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基以便进行对比培养，换液后请将瓶盖拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，则将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲几下培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM条件下离心5分钟。弃去上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，某些细胞可能由于贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再次离心，弃上清后用1-2ml完全培养基重悬。按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

若细胞在运输途中出现问题，如细胞丢失、瓶身损坏、培养液漏液等情况，均可重发。若细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后可重发。常温发货的细胞静置24小时后或干冰运输的细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活，需提供真实的细胞状态照片，核实后可重发。对于细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后将予以重发。收到细胞当天和第2、3天请拍照，若未提供照片视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供相关照片及操作步骤，技术人员将判定责任后决定是否重发。

2）不予重发的情况

如因客户自身原因造成的细胞污染，不予重发；错误操作导致的细胞状态不佳，不予重发；非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态问题，亦不予重发；若收货后2天内未告知相关问题，也将不予重发。具体情况视情况而定，感谢您的理解与支持。