荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种通过实时监测荧光信号来定量分析DNA或RNA的技术。这项技术因其高灵敏度、高特异性和快速定量的优点而广泛应用于生物医学领域，特别是在基因表达分析和病原体检测等方面。

技术原理

荧光定量PCR的基本原理是通过在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，实现对核酸分子的定量检测。反应体系中除了传统的模板DNA、引物、dNTPs、聚合酶和缓冲液外，还需要荧光基团。荧光定量PCR可根据所使用的荧光化学物质分为两大类：荧光染料法和荧光探针法。

荧光染料法

以SYBR Green I为代表，这种染料能够特异性地结合双链DNA。游离状态下几乎无荧光，但与DNA结合后，会显著增强荧光信号。随着PCR产物的增加，荧光信号的强度也随之增强，可以监测到双链DNA的扩增。然而，该方法无法区分特异性与非特异性产物。

荧光探针法

以TaqMan探针为例，探针两端分别标记报告荧光基团和淬灭基团。在扩增过程中，探针与目标序列杂交，Taq酶的5'外切酶活性会降解探针，使得荧光基团和淬灭基团分离，从而增强荧光信号。这种方法只有在目标序列扩增时才会产生荧光，显著提高了特异性。

实时监测

荧光定量PCR的一个重要优势在于实时监测。在每个PCR循环后，设备会即时检测荧光信号，无需在反应结束后进行额外的电泳或染色步骤。荧光信号的变化能够准确反映PCR产物的累积情况。

数据解读

通过荧光信号的累积，科研人员可以绘制出扩增曲线，包括基线期、指数期和平台期。特别是在指数期，荧光信号呈指数增长，并与模板量呈现线性关系。设定荧光阈值后，能够获得每个反应管的CT值（循环阈值），CT值与起始模板量的对数成线性关系，从而实现定量分析。

定量分析

利用已知起始拷贝数的标准品制作标准曲线，未知样品的CT值可以通过这条标准曲线计算出起始拷贝数。这种方法适用于绝对定量（直接计算拷贝数）和相对定量（比较不同样品间的相对表达量）。

技术优势

尊龙凯时提供的荧光定量PCR技术具有诸多优势，如灵敏度高、特异性强、无污染、自动化程度高及结果可靠等。因此，该技术被广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因突变检测等领域。